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卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2019-05-05 點(diǎn)擊量:1966


 

 

卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

 

藥物概述及檢測(cè)原理

 

卡那霉素是氨基糖甙類(lèi)藥物,被廣范應(yīng)用于動(dòng)物疾病的治療,由于其具有神經(jīng)毒性和腎臟毒性,歐美國(guó)家及我國(guó)均要求其*使用。

本公司的卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒使用新一代生物技術(shù)開(kāi)發(fā),具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)。

本試劑盒利用卡那霉素抗體與卡那霉素可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì),先在酶標(biāo)板上預(yù)包被抗原,再加入標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)和卡那霉素抗體工作液,樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的卡那霉素藥物與包被抗原競(jìng)爭(zhēng)卡那霉素抗體,后加入底物催化顯色。此時(shí)顯色深度與標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)中卡那霉素藥物的含量成反比。

 

  • 試劑盒內(nèi)包含組分:

 

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品工作液:0 ppb、0.2 ppb、0.6 ppb、1.8ppb、5.4 ppb、16.2ppb,
  2. 1 mL/瓶。
  3. 96孔酶標(biāo)板:1塊
  4. 卡那霉素抗體工作液:1瓶(7mL/瓶
  5. 酶標(biāo)二抗工作液:1瓶(7mL/瓶
  6. 20×濃縮洗滌液:1瓶(30 mL/
  7. 20×濃縮組織復(fù)溶液:1瓶(10 mL/
  8. 10×濃縮蜂蜜復(fù)溶液:1瓶(10 mL/
  9. 底物A液1瓶(7 mL/瓶
  10. 底物B液1瓶(7 mL/瓶
  11. 終止液:1瓶(7mL)
  12. 說(shuō)明書(shū)
  13. 蓋板膜
  • 用戶(hù)需要自備的設(shè)備和試劑

 

儀器

  1. 酶標(biāo)儀(檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm630 nm)
  2. 電子天平(精度:0.01 g)
  3. 離心機(jī)(4000 g及以上
  4. 生化培養(yǎng)箱可調(diào)25℃)
  5. 搖床
  6. 旋渦振
  7. 微量移液器20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排槍
  8. 計(jì)時(shí)器

試劑:試劑均為分析純

  1. 氫氧化鈉
  2. 氯化鈉
  3. 氯化
  4. 磷酸二氫鉀
  5. 十二水合磷酸氫二鈉
  6. 去離子水

 

  • 試劑盒特異性

   試劑盒與其他藥物的交叉反應(yīng)率

  1. 卡那霉素………………………100%
  2. 大觀霉素、鏈霉素、替米考星<0.1%

 

  • 樣本檢測(cè)步驟
  1. 工作液準(zhǔn)備
  1. 組織復(fù)溶工作1份20×濃縮組織復(fù)溶去離子水19按照1:19的比例稀釋即得。
  2. 蜂蜜復(fù)溶工作1份10×濃縮蜂蜜復(fù)溶去離子水9按照1:9的比例稀釋即得
  3. 緩沖液: 0.1M PBS溶液(PH=10-11)  稱(chēng)取13.4g十二水合磷酸氫二鈉.20g氯化鈉.0.32g氫氧化鈉.0.5g磷酸二氫鉀.0.5g氯化鉀加去離子水溶解定溶至500ml。
  1. 1 M鹽酸溶液量取1ml濃鹽酸加去離子水11ml溶解混勻即得。
  1. 洗滌工作液1份20×濃縮洗滌液去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得
  1. 樣品前處理

組織(雞肉、豬肉)(稀釋數(shù):20

  • 稱(chēng)取1.0±0.05g均質(zhì)樣本至50ml聚苯乙烯離心管,加入3ml緩沖液見(jiàn)配液5.1),上下顛倒振搖5min;
  • 放入60℃水浴環(huán)境中60min,取出4000g以上,室溫離心10min
  • 移取上清液100ul,加入400ul組織復(fù)溶工作液(見(jiàn)5.1中渦旋20s;
  • 50ul用于分析。

 

蜂蜜(稀釋數(shù):15

  • 稱(chēng)取1.0±0.05g蜂蜜樣本至50ml塑料離心管中;
  • 加入2ml 去離子水,強(qiáng)烈震搖2min (或使用渦動(dòng)儀渦動(dòng)1min);
  • 取100μL上清液至400μL蜂蜜復(fù)溶工作(見(jiàn)5.1中,充分渦動(dòng)30s;
  • 取50 μL液體進(jìn)行分析。

   液態(tài)奶樣本方法一(稀釋數(shù):10(同四環(huán)素液態(tài)奶方

   法一致)

  • 樣好的液態(tài)奶樣本解凍后于室溫靜置平衡30min以上;
  • 將槍頭伸入原奶樣本下層,小心取出1ml樣本加入2ml離心管中注意:盡量不要取到上層的奶油);
  • 加入50μL 1M鹽酸(見(jiàn)5.1強(qiáng)烈震搖1min (或使用渦動(dòng)儀渦動(dòng)30s);
  • 使用離心機(jī)室溫4000 g以上離心10 min;
  • 取上層清亮液體50μL加入另一干凈離心管中(注意:盡量不要取到上層的奶油),再加入450μL組織復(fù)溶工作(見(jiàn)5.1,強(qiáng)烈震搖1min (或使用渦動(dòng)儀渦動(dòng)30s);
  • 取50 μL液體進(jìn)行分析。

   液態(tài)奶樣本方法二(稀釋數(shù):40(同四環(huán)素液態(tài)奶方法

   一致)

  • 50ul液態(tài)奶樣品于1950ul組織復(fù)溶工作(見(jiàn)5.1中;
  • 充分渦動(dòng)1 min混勻;
  • 立即取50ul進(jìn)行檢測(cè)。

 

  1. 檢測(cè)
  • 準(zhǔn)備:要使用的酶標(biāo)板條插入酶標(biāo)板架上,并記錄各標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,為減小檢測(cè)值波動(dòng)建議做雙孔平行實(shí)驗(yàn)(每個(gè)樣本/標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)兩孔,未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后,保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì)
  • 加樣:向?qū)?yīng)微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品工作液/樣品溶液50 μL,向每孔中加入50 μL酶標(biāo)二抗工作液,再向每孔中加入50 μL抗體工作液,;
  • 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻,蓋好蓋板膜25℃避光反應(yīng)20 min;
  • 洗滌:取出酶標(biāo)板后小心揭開(kāi)蓋板膜,板孔中液體后,在每孔加 250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4,將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上,用力拍干;
  • 顯色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B混合液注:底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合混合液在10 min內(nèi)使用,切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效)
  • 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻,蓋好蓋板膜25℃避光反應(yīng)10 min;
  • 終止:在反應(yīng)后的微孔中加入終止液50μL/孔,底物液由藍(lán)變黃表明終止成功。
  • 讀數(shù):終止后的酶標(biāo)板應(yīng)在5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù),建議使用450 nm、630 nm雙波長(zhǎng)讀取酶標(biāo)板吸光度值。
  1. 計(jì)算結(jié)果
  • 設(shè)各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)的吸光度平均值B,零標(biāo)準(zhǔn)(濃度為0 ppb的標(biāo)準(zhǔn)品)吸光度平均值B0以(B/B0100%各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)對(duì)應(yīng)的吸光度的百分比:
  • 使用半對(duì)數(shù)系統(tǒng)代入標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的吸光度的百分比,與標(biāo)準(zhǔn)品濃度擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
  • 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程中可得出樣品對(duì)應(yīng)的濃度,乘以樣品相應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中檢測(cè)物含量。

 

  • 試劑盒參數(shù)
  • 試劑盒靈敏度0.2 ppb;
  • 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍0.2 ppb-16.2 ppb;
  • 板內(nèi)變異系數(shù):<5%;
  • 板間變異系數(shù):<15%
  • B0吸光度理想>0.8;
  • 回收率90%±30%
  • 樣品低檢測(cè)限:

    豬肉、雞肉…………約6ppb

    蜂蜜…………………約5ppb

        液態(tài)奶樣本方法一…約5ppb

        液態(tài)奶樣本方法二10ppb

注:ppb=ng/mL或ng/g。

 

  • 分析限制

   本試劑盒為定量或半定量試劑盒,建議用于大量樣本篩查分析。若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,建議使用儀器方法開(kāi)展確證實(shí)驗(yàn)(如GC/MS、LC-MS/MS等)。

 

  • 試劑盒貯存條件
  • 試劑盒貯存溫度為2-8℃,切勿凍存
  • 未使用完的酶標(biāo)板條須密封保存2-8℃的環(huán)境中。

 

  • 注意事項(xiàng)
  • 使用試劑盒前,請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
  • 試劑盒使用前,需將盒內(nèi)各組份置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上回溫至室溫(25±2℃)(提示:約1 h)。
  • 試劑在使用前搖勻,混合時(shí)應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡。
  • 槍頭為一次性用品,為防止試劑交叉污染,檢測(cè)過(guò)程中所用槍頭不得重復(fù)使用。
  • 請(qǐng)勿使用過(guò)期試劑盒,不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用。
  • 樣品處理完畢后請(qǐng)立即分析,否則可能影響檢測(cè)結(jié)果。
  • 底物A液、底物B液均為無(wú)色透明液體,若在使用前已變成藍(lán)色或混合后立即變藍(lán),說(shuō)明試劑已污染或變質(zhì)。
  • 加樣過(guò)程在保證精度的前提下一定要迅速,以免反應(yīng)時(shí)間差對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響
  • 終止液中含有硫酸,若不小心濺上皮膚或衣物請(qǐng)立即用大量清水沖洗。若不慎入眼,請(qǐng)?jiān)?清洗后去醫(yī)院檢查。

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