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四環(huán)素快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗四環(huán)素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素的含量。
二、試劑盒特性
雞肉樣本:
四環(huán)素 ··········································· 0.4ppb
二jiaan四環(huán)素 ·································· 0.4ppb
吡四環(huán)素 ········································ 0.4ppb
金霉素 ········································ 0.4ppb
脫甲基金霉素 ································· 1.2ppb
土霉素 ·········································· 0.8ppb
強力霉素 ······································· 1ppb
蜂蜜樣本:
四環(huán)素 ·········································· 0.5ppb
二jia an四環(huán)素 ································· 0.5ppb
吡四環(huán)素 ······································ 0.5ppb
金霉素 ········································· 0.5ppb
脫甲基金霉素 ································ 1.5ppb
土霉素 ··········································· 1ppb
強力霉素 ········································ 1.2ppb
四環(huán)素 ·········································· 100%
二J a四環(huán)素 ································· 125%
吡四環(huán)素 ······································· 110%
金霉素 ··········································· 100%
脫甲基金霉素 ··································· 35%
土霉素 ············································ 58%
強力霉素 ········································· 45%
蜂蜜 ··········································· 85±20%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 |
| |
2 | 標準品濃縮液(81ppb) | 1ml | 黑色帽 |
|
3 | 高濃度標準品(100ppb) | 1ml | 黑色帽 |
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4 | 酶標記物 | 7ml | 白色帽 | |
5 | 抗體工作液 | 7ml | 白色帽 | |
6 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 | |
7 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 | |
8 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 | |
9 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 | |
10 | 10X樣本提取液 | 50ml*2 | 透明帽 | |
11 | 標準品復(fù)溶液 | 15ml*2 | 藍色帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:甲醇
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 樣本提取液A
用去離子水450ml與50ml 10X樣本提取液混勻或按9:1的比例按需配制(如10X樣本提取液有結(jié)晶,需溶解后在進行稀釋)。
配液2 樣本提取液B
取甲醇50ml與310ml樣本提取液A混勻或按5:31的比例按需配制。
蜂蜜處理方法
1、 稱取1±0.05g均質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,加入10ml樣本提取液B(見配液2),振蕩3min,室溫4000r/min以上,離心5min;
樣本稀釋倍數(shù): 10倍 六、 酶標免疫分析程序:
標準品6:50µl標準品濃縮液(81ppb)用950µl標準品復(fù)溶液稀釋 4.05ppb
標準品5:600µl標準品復(fù)溶液與300µl標準品6混合 1.35ppb
標準品4:600µl標準品復(fù)溶液與300µl標準品5混合 0.45ppb
標準品3:600µl標準品復(fù)溶液與300µl標準品4混合 0.15ppb
標準品2:600µl標準品復(fù)溶液與300µl標準品3混合 0.05ppb
標準品1:標準品復(fù)溶液 0ppb
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.05ppb為1.816;0.15ppb為1.415;0.45ppb為0.74;1.35ppb為0.313;4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb~4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb~0.45ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以DI一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標,以四環(huán)素標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎索取)
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。
實驗代做服務(wù):
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