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植物淀粉含量試劑盒說明書
可見分光光度法
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
淀粉是植物中糖的主要儲存形式,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。
測定原理:
利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,進一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量,即可計算淀粉含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸(不允許快遞)、
研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;
淀粉提?。?/span>
1、 稱取0.1~0.2g 樣本(建議稱取約0.1g樣本)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀。
2、 沉淀中加入0.5mL蒸餾水,放入95℃水浴中糊化15min(蓋緊,以防止水分散失)。
3、 冷卻后,加入0.35mL 試劑二,25℃提取15min,振蕩3-5次。
4、 加入0.85mL 蒸餾水,混勻,3000g,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表 (在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑) :
1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。
3、 工作液的配制:臨用前在試劑三中加入7.5mL蒸餾水后,緩慢加入42.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑 4℃保存一周;
4、 樣本測定:取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散
失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A。
淀粉含量計算:
標準條件下測定的回歸方程為 y=5.872x-0.0295;
x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1]÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1.7 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)
濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意 :由于工作液具有強腐蝕性,請謹慎操作。
若吸光值大于1,請將樣本用提取液稀釋后再測定,計算公式中乘以相應的稀釋倍數(shù)。
提取液的配置:0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。
低檢測限為10μg/g 鮮重或100ng/mgprot 。
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