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H2S 含量測定試劑盒說明書
更新時間:2019-12-27 點擊量:2085

H2S 含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定   

產(chǎn)品內(nèi)容:  

提取液:液體50mL×1 瓶,4保存。 

試劑一:液體 25mL×1 瓶,4保存。 

試劑二:液體 15mL×1 瓶,4保存。 

試劑三:液體 15mL×1 瓶,4避光保存。 

試劑四:液體15mL×1 瓶,4保存。 

試劑五:液體 3mL×1 管,4避光保存。 

產(chǎn)品說明: 

H2S 是一種新型氣態(tài)信號分子,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),生理濃度的 H2S 對神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長時程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。 

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán),亞甲基藍(lán)在 665nm處有大吸收峰,通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品:  

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品處理: 

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4離心 10min,取上清,置冰上待測。 

2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7秒,總時間 3min);然后 10000g,4,離心 10min,取上清置于冰上待測。 

3. 血清(漿):直接測定。

二、測定步驟: (取1.5ml離心管,按照下表操作) 

 

空白管

測定管

樣品(μL

 

250

H2OμL

250

 

試劑一(μL

250

250

充分震蕩混勻

試劑二(μL

250

250

12000rpm,4,離心 10min,去上清,留沉淀

H2OμL

500

500

12000rpm,4,離心 10min,去上清,留沉淀

試劑一(μL

250

250

試劑三(μL

250

250

充分震蕩混勻

試劑四(μL

250

250

12000rpm,4,離心10min,取上清

試劑五(μL

50

50

混勻,25靜置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管調(diào)零,測定665nm吸光值,記為A665。

 

三、H2S含量計算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y = 0.0044x,R2 = 0.9988

1)組織樣品 

a.按照蛋白濃度計算 

H2Sμmol/mg prot= A665÷0.0044×V反總÷(V×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr

b.按照樣本重量計算 

H2Sμmol/g= A665÷0.0044×V反總÷(V÷V樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W

(2)液體樣本

 H2Sμmol/L= A665÷0.0044×V反總÷V= 727×A665

(3)細(xì)胞 

H2Sμmol/104 cell= A665÷0.0044×V反總÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個)×10-3 =0.727×A665÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)

V反總:反應(yīng)總體積,0.8mLV樣:反應(yīng)中樣品體積,0.25mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,gCpr:蛋白濃度,mg/mL。

動物疾病類檢測產(chǎn)品

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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