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冰凍干燥技術(shù)
更新時(shí)間:2011-07-08 點(diǎn)擊量:1521

冰凍干燥就是使蛋白樣品液在預(yù)先冰凍的狀態(tài)下,用抽真空的方法,不經(jīng)液態(tài),直接升華,除去其中所含水分,并使樣品蛋白成為干燥制劑的過(guò)程。在免疫酶技術(shù)中,所用的血清、酶等在溶液中容易變性腐敗,制成干燥制劑后可長(zhǎng)時(shí)間地在室溫或冰箱(4℃)內(nèi)保存而不失活,并且便于攜帶。

之所以要在冰凍是因?yàn)楸桓稍飿悠匪只蛉軇┯捎谥車(chē)諝鈮毫Φ臏p少而增加蒸發(fā)速度,并且真空度愈高,溶液沸點(diǎn)越低,蒸發(fā)越快。

冰凍真空干燥與真空干燥和噴霧干燥相比,在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用得更多更普遍。

1.  冰凍干燥血清的程序

(1)       先將適量血清傾倒在適當(dāng)大小的培養(yǎng)皿中(樣品液厚度在1cm以下),在低溫—20℃以下)下冰凍成固態(tài)。

(2)       在冰凍干燥裝置中,分別放置固體氫氧化鈉和五氧化二磷,真空干燥器上端抽氣管通過(guò)五氧化二磷干燥管與真空泵相連。

(3)       將冰凍血清塊連同培養(yǎng)皿放進(jìn)真空干燥器內(nèi),立即封閉干燥器(事先在蓋沿涂上凡士林),開(kāi)動(dòng)油泵,一般經(jīng)510h后,即可得冰凍干燥制劑。

(4)       冰凍干燥完畢。首先逐漸打開(kāi)干燥器頂蓋玻璃閥,慢慢放氣,待整個(gè)系統(tǒng)中壓力上升到大氣壓后,取下樣品干燥容器,zui后關(guān)閉真空油泵。

 2.討論

1)冰凍干燥的效果,取決于真空泵的真空度與口徑合適的管道。真空油泵選用抽空容量大的,所有接管應(yīng)力求粗短。

    2)樣品如果是溶液,則是水溶液,以避免有機(jī)溶劑降低冰點(diǎn),進(jìn)入泵內(nèi)。濃度要適中,不低于1.5%。

(3)樣品如用緩沖液作為溶劑,用有揮發(fā)性的,例如碳酸鹽或醋酸鹽緩沖液;若是非揮發(fā)性的,則要考慮pH和鹽濃度對(duì)樣品的影響。例如用pH7.0磷酸鹽緩沖液,由于冰凍干燥時(shí)Na2鹽比Na鹽先結(jié)晶,pH降至約3.5,對(duì)樣品有害。在樣品液中加入少量的明膠、乳糖或葡萄糖等,有利于保存活性。

(4)樣品預(yù)凍時(shí)先放在普通冰箱冷至0℃后,迅速移入一20℃以下的冰箱驟冷凍結(jié)。

(5)在抽真空時(shí),樣品萬(wàn)一融化,必須重新預(yù)凍,并要檢查原因。

(6)抽真空約30min,如盛有預(yù)凍樣品的容器結(jié)霜,表明運(yùn)轉(zhuǎn)良好。由于樣品中水分的升華,溫度降低,樣品自然處于冰凍狀態(tài),不必在干燥器外邊采取冷卻措施。

(7)干燥制劑裝于小瓶,用蠟封口,貯于普通冰箱。

 

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