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通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2020-08-03 點(diǎn)擊量:2551

 

通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

 

主要用途

 

GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)有機(jī)溶劑萃取,必要時(shí)皂化處理,進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量測(cè)定樣品中α-生育酚的含量權(quán)wei而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E檢測(cè)(包括αβ、γ、δ形式)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

維生素E(vitamin E),又稱為生育酚(tocophenol;TCP),是一種由各種甲基化的酚類構(gòu)成的有機(jī)化合物,為脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式:4種生育酚,4種生育三烯酚(Tocotrienols),分別有α、βγ、δ。其中α-生育酚是維生素E中ju活性,也是常見(jiàn)代表,在食物添加劑的命名上標(biāo)記為E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成,而不能在動(dòng)物中產(chǎn)生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚(yú)、蔬菜等中含量豐富,包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預(yù)防自發(fā)流產(chǎn)、增強(qiáng)免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細(xì)胞膜的氧化、清除自由基、預(yù)防冠心病等作用。維生素E缺乏將導(dǎo)致神經(jīng)性疾患,例如脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(spinocerebellar ataxia)、肌?。╩yopathies)、貧血等。通過(guò)有機(jī)溶劑萃取,必要時(shí)進(jìn)行皂化處理,排除脂類、蛋白和碳水化合物的干擾,進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量α-生育酚的含量。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

GENMED處理液(Reagent A)       20毫升

GENMED皂化液(Reagent B)  20毫升

GENMED酸性液(Reagent C)       20毫升

GENMED萃取液(Reagent D)   100毫升

GENMED溶解液(Reagent E)       20毫升

GENMED流相液(Reagent F)      500毫升

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)    500微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1份

 

保存方式

 

保存GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,避免光照;試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋;GENMED皂化液(Reagent B)和GENMED酸性液(Reagent C)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品處理和標(biāo)準(zhǔn)液配制的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品處理

DOUNCE勻漿器:用于裂解樣品

恒溫水槽或培養(yǎng)箱:用于樣品反應(yīng)孵育和晾干

高效液相色譜儀(HPLC):用于定量測(cè)定

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 樣品準(zhǔn)備 

 

1)固態(tài)樣品準(zhǔn)備

  • 秤取50毫待測(cè)固態(tài)樣品  
  • 移入一個(gè)液氮凍存管
  • 即刻放進(jìn)液氮罐過(guò)夜
  • 次日從液氮罐里取出,即刻(快速)碾碎組織成粉末(注意:切莫使樣品凍融
  • 加入500微GENMED處理液(Reagent A
  • 全部轉(zhuǎn)移到DOUNCE勻漿器
  • 用勻漿棒勻化組織(約80下)
  • 全部轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管
  • 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
  • 再加入500微升GENMED處理液(Reagent A到含有沉淀顆粒的1.5毫升離心管中
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上清液合并到上述15毫升錐形離心管中(總量1毫升)
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B)
  • (選擇步驟)渦旋震蕩15秒
  • (選擇步驟)放進(jìn)70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
  • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C),混勻
  • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D)
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟21二次
  • 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1300g 
  • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
  • 放進(jìn)40干式培養(yǎng)箱晾干
  • 加入500微升30預(yù)熱的GENMED溶解液(Reagent E),混勻
  • 即刻進(jìn)行高效液相色譜分析(注意:如果暫時(shí)保存,建議在4不超過(guò)48小時(shí);-20不超過(guò)3月)

 

2)液態(tài)樣品準(zhǔn)備

  • 移取500微升待測(cè)液態(tài)樣品到1.5毫升離心管
  • 加入500微升GENMED處理液(Reagent A 
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B)
  • (選擇步驟)渦旋震蕩15秒
  • (選擇步驟)放進(jìn)70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
  • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C),混勻
  • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D)
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12二次
  • 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1300g 
  • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
  • 放進(jìn)40干式培養(yǎng)箱晾干
  • 加入500微升30預(yù)熱的GENMED溶解液(Reagent E),混勻,避光
  • 即刻進(jìn)行高效液相色譜分析(注意:如果暫時(shí)保存,建議在4不超過(guò)48小時(shí);-20不超過(guò)3月)

 

  • 測(cè)定準(zhǔn)備

 

  • 開(kāi)啟儀器預(yù)熱15分鐘
  • 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀(HPLC)參數(shù)

 

參數(shù)

推薦一

推薦二

推薦三

補(bǔ)充說(shuō)明

色譜柱

長(zhǎng)度:25cm

直徑:4.6mm

長(zhǎng)度:15cm

直徑:3.9mm

長(zhǎng)度:12.5cm

直徑:4.0mm

Waters儀器或

Agilent儀器

固定相

ODS

ODS

ODS

 

流動(dòng)相

GENMED流相液(Reagent F)

 

流速

1毫升/分鐘

1毫升/分鐘

1毫升/分鐘

 

注射容量

20微升

20微升

20微升

10微升至100微升

檢測(cè)

紫外

紫外

紫外

 

波長(zhǎng)

294nm

294nm

294nm

290至300nm

柱溫

40

40

40

25至45

峰值時(shí)間(retention)

5分鐘

16分鐘

10分鐘

參考

運(yùn)行時(shí)間

10分鐘

20分鐘

15分鐘

參考

 

  • 使用GENMED流相液(Reagent F)運(yùn)行1次(30毫升),以達(dá)到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

 

  • 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為15號(hào)管
  • 分別加入100微升GENMED溶解液(Reagent E15號(hào)管
  • 移取100微升GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G1號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升1號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G2號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升2號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G3號(hào)管,混勻
  • 小心移取100微升3號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G4號(hào)管,混勻
  • 15號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

管號(hào)

GENMED溶解液(Reagent E

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G

標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度

1

100微升

100微升

20微克/毫升

2

100微升

100微升1號(hào)管

10微克/毫升

3

100微升

100微升2號(hào)管

5微克/毫升

4

100微升

100微升3號(hào)管

2.5微克/毫升

5

100微升

0

0

 

四、色譜分析

 

  • 將上述配制的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)和待測(cè)樣品放進(jìn)30培養(yǎng)箱預(yù)熱
  • 每次(每個(gè)樣品)注射20微升
  • 每次(每個(gè)樣品)運(yùn)行10至20分鐘
  • 獲得色譜波峰圖:波峰面積(peak area)或峰值,保存記錄
  • 全部運(yùn)行完成,使用適量的GENMED流相液(Reagent F)清洗色譜柱

 

五、計(jì)算含量

 

  • 方法一:通過(guò)儀器中的軟件進(jìn)行測(cè)算
  • 方法二:構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為波峰面積(peak area);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度(微克/毫升),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)α-生育酚濃度(微克/毫升)
  • 方法三:公式計(jì)算(選擇單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)液)

 

樣本α-生育酚濃度(微克/毫升)=【樣本波峰面積(peak area)X標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度】÷對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度的波峰面積

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作
  • 本產(chǎn)品可以用于β、γ、δ-生育酚的檢測(cè)
  • 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍是0.3至50毫克/升
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜
  • 如果樣品中脂類含量高,建議皂化處理
  • GENMED皂化液(Reagent B)GENMED酸性液(Reagent C)具有腐蝕性,注意操作安全
  • 建議使用GENMED溶解液(Reagent E)作為陰性對(duì)照或作為基準(zhǔn)線
  • 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達(dá)均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時(shí)間偏移等
  • 用戶可以使用已知濃度的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)或醋酸生育酚作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)加入到樣品中,然后進(jìn)行萃取,檢測(cè)回收率(recovery)
  • α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

 

 

 

  • α-生育酚的出峰時(shí)間(retention)以用戶操作時(shí),使用的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)實(shí)際出峰為準(zhǔn)
  • 用戶可以使用熒光檢測(cè):激發(fā)波長(zhǎng)290nm,散發(fā)波長(zhǎng)330nm
  • 本公司提供系列維生素檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

 

使用承諾

 

秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

訂購(gòu)信息

 

單組份訂購(gòu)信息

 

編號(hào) 名稱 規(guī)格

GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒 20

GMS19071.2.1A GENMED處理液(Reagent A     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液(Reagent B 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液(Reagent C      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液(Reagent D 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液(Reagent E 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液(Reagent F 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G      10毫升

 

 

 

試劑盒訂購(gòu)信息 

 

產(chǎn)品編號(hào)

名稱

規(guī)格

GMS19071.1

維生素E比色法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.1

通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.2

血液維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.3

尿液維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.4

奶品維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.5

植物維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.6

藻類維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

GMS19071.2.7

油類維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒

20次

 

 

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測(cè)

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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