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磁珠法PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒說明書
Magbind PCR Purification Kit
目錄號:YJ2516
運輸條件:室溫(15-25℃)。
保存條件:MBPure 2-8℃保存,其他組分室溫(15-25℃)保存。
組分說明
Size 5 ml 60 ml
MBPure 5 ml 60 ml
Buffer PW 12 ml 3×48 ml
Buffer EB 6 ml 60 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途
上海研謹(jǐn)生物中國生物試劑生產(chǎn)商
產(chǎn)品簡介
本試劑盒提供了一種簡單、快速、的核酸純化方法。MBPure與樣品按一定比
例混合后,磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗后,洗脫得到的DNA純度高,A260/A280 的比值在1.7-1.9之間,A260/A230的比值通常在2.0以上。經(jīng)該試劑盒純化得到的 DNA適用于測序,克隆等下游實驗。
試劑盒說明
Sample type Typical yield Sample type Typical yield
5000 bp segment Up to 90% 1000 bp segment Up to 90%
500 bp segment Up to 80% 200 bp segment Up to 80%
純化回收得率的計算
我們建議通過瓊脂糖電泳純化前后的樣品進(jìn)行回收得率的計算。我們不建議通過
260 nm處的光吸收值來計算回收得率。因為溶液中單鏈、雙鏈DNA和dNTP以及一些純
化前的某些雜質(zhì)在260 nm處都有光吸收,這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會得到
一個假的、虛高的DNA濃度值。
實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項
1.嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
2.磁珠長期放置后會聚集成團(tuán),從而使磁珠表面積減小,降低樣品回收得率,使用前
一定要渦旋振蕩*混勻磁珠(這一過程通常需要渦旋振蕩20秒)。
3.本試劑盒不適用于純化回收小于100 bp的DNA片段,如果要回收小于100 bp的DNA
片段,可將MBPure的用量增加到樣品體積的4倍。
自備儀器
1.恒溫混勻儀——建議使用Eppendorf設(shè)計生產(chǎn)的Thermomixer。
2.磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。
操作步驟(手動)
1.渦旋振蕩MBPure 20秒,使其*混勻為均一溶液。
2.向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產(chǎn)物或其他DNA樣本,然后加入2倍樣品體積的MBPure。渦旋振蕩混勻后,室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鐘。
注意:如無Thermomixer,可將離心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。
3.將上一步的離心管放于磁力架上,直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。
4.保持離心管固定于磁力架上,棄去溶液,期間避免接觸磁珠。
5.向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW后,將離心管從磁力架上取下,渦旋振蕩
10秒鐘后將離心管重新放回磁力架。靜置1分鐘,待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁后*棄去漂洗液。
6.重復(fù)步驟5。
7.保持離心管固定于磁力架上靜置放置10分鐘,使乙醇*揮發(fā)干凈。
注意:如果磁珠干燥過度會極大的降低DNA的回收得率。
8.將離心管從磁力架上取下,加入20-100 μl Buffer EB,渦旋振蕩將磁珠重懸于洗脫液
中后將離心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鐘。
注意:如無Thermomixer,可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。
9.將離心管放于磁力架上直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。
10.將洗脫液轉(zhuǎn)移至一個新的1.5 ml離心管中。此時,可棄去磁珠。